Od gobe do micelija 1
From Wiki
Ko imamo izdelan laboratorij lahko pričnemo z pridelavo micelija. Pomembno je vedeti, da v vseh fazah dela pazimo na sterilnost. V zraku, na tleh, na rokah in predvsem v ustih kar mrgoli bakterij, spor, virusov in organizmov vseh vrst. Vsak od teh tujkov nam brezkompromisno uniči celoten trud. Za vzdrževanje sterilnega okolja med delom uporabljamo izopropanol in vodikov pereoksid. Za sterilizacijo kozarcev in petrijevk ekonom lonec in pečico. Za sterilni skalpel pa alkoholni gorilnik.
Poznana sta dva načina razmnoževanja micelija. Prvi je iz tkivne kulture ( kloniranje ), drugi je Razmnoževanje iz spor ( spolno razmnoževanje ). Pri večjih gobah se navadno poslužujemo tkivnega razmnoževanja, ki ga bom skušal čim natančneje opisati.
Pri priznanem gojitelju kupimo najlepšo gobo kar jih ima, saj si le tako zagotovimo dobro izhodišče (gen). Goba - v našem primeru shiitake- naj bo srednje velika in neovenjena, skratka lepa in sijoča na pogled.
Petrijevke ( po 5 skupaj ) neprodušno zavijemo v alu folijo in damo v pečico na 200 stopinj. Po 20 minutah pečico izklopimo in pustimo da se ohladijo kar v njej. V vmesnem času skuhamo agar, ki je najbolj hranljiva substanca za začetno rast micelija iz tkiva. Olupimo 300g krompirja in ga narežemo na rezine. Kuhamo ga v litru vode eno uro, počakamo da se ohladi in precedimo skozi gosto krpo. V dobljeno krompirjevo vodo vmešamo 10g glukoze in 20g agra (agar agar). Dobljeno tekočino prelijemo v kozarec ki je temperaturno odporen. Osebno uporabljam tistega 800ml, ki ga kupim v trgovini z kemijskim blagom- steklokeramičnega. Kozarec naj bo poln največ do dveh tretin. Pokrijemo ga z tanko krpo, čezenj poveznemo alu folijo in zatesnimo z elastiko. Postavimo ga v ekonom lonec, vendar ne na dno. Najboljše je, da na dno postavimo krožnik. Če je namreč kozarec na dnu se agar lahko zasmodi.Vode v loncu naj bo okrog 3 cm. Kuhamo pod pritiskom pol ure, nato počakamo kakšne dve do tri ure da se lonec ohladi. Po končanem kuhanju ne spuščajte pare ročno, ker lahko pride do podpritiska in vam zrak iz okolice potegne v agar.
Ko ocenimo, da je agar ohlajen, je čas za pripravo delovne povšine. Prižgemo ventilator in počistimo delovno površino (šipe) pred filtrom z izopropanolom. Sam uporabljam kar krpo, ki jo uporabljam samo za ta namen, in jo po končanem delu vedno očistim- operem.
Iz pečice vzamemo v folijo zavite petrijevke. Predno damo zavitek na delovno površino ga razkužimo z izoprapanolom. Z razkuženimi rokami ga pred filtrom odvijemo in zložimo petrijevke na levo stran delovne površine (če smo levičarji na desno). Postopek ponovimo z kozarcem v katerem je agar, s to razliko, da le tega postavimo na desno (zaradi lažjega rokovanja).
Rolo folije za živila z ostrim nožem odrežemo tako, da dobimo približno 3cm široko rolico.
Še enkrat razkužimo roke. Z eno roko dvignemo pokrov petrijevke, z drugo pa iz kozarca v petrijevke natočimo agar. Petrijevko zapremo s pokrovom in jo postavimo na stran delovne površine ( še vedno v sterilnem delovnem okolju ). Debelina agra v petrijevki naj bo od 4-5mm. Ko enkrat napolnimo vse petrijevke si lahko malo oddahnemo.
Zaključek prve faze predstavlja vnos tkiva na agar. Gobico z skalpelom pri betu vzdolžno zarežemo kakšen centimeter, nato jo z rokami pred filtrom razpolovimo tako, da je sredinski del gobe ves čas obrnjen proti filtru (prepihu). Gre za to, da je goba v svojem notranjem delu v bistvu sterilna in zaščitena pred okužbo. Ta del - meso pri vrhu beta prenesemo na agar. Nad gorilnikom podržimo skalpel dokler ne zažari. Ohladimo ga pred filtrom ( pribl. 20s) in iz omenjenega dela gobe izrežemo košček ( okrog 2 krat 2mm ). Z konico skalpela ta košček prenesemo na sredino petrijevke ( agra ). Na petrijevko poveznemo pokrov in jo damo na stran delovne površine. Ko smo enkrat cepili vse petrijevke, vzamemo v roke rolico folije za živila, previdno primemo petrijevko in jo pri strani tesno zavijemo. Folija ima to funkcijo da diha, je pa pregosta, da bi skozi sebe spuščala bakterije in ostale okužbe.
Petrijevke postavimo v temen inkubator na povprečno temperaturo 25 stopinj celzija. Po približno 4-5 dneh micelij ( kot nekakšna penica ) preraste košček gobe, nato se začne širiti po agru. Na pravi temperaturi je petrijevka preraščena v 10 do 14 dneh. V vmesnem času opazujemo rast micelija in sproti odstranjujemo petrijevke, pri katerih smo opazili morebitno okužbo.
Avtor: Mih Lindič
<<Nazaj
